2009年, 第31卷, 第6期　刊出日期：2009-12-30

  

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专家述评
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  复杂疾病遗传分析的现状、问题和展望

  方福德

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 661-663. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.001

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  摘要：本文评述了复杂疾病遗传分析的现状和存在的主要问题，提出了一些解决问题的意见与建议，并对该领域未来发展方向和趋势作了展望。
论著
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  代谢型谷氨酸受体7基因的拷贝数变异与精神分裂症的相关性

  赵亚丽;张克让;许琪;沈岩

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 664-668. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.002

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  摘要：目的 探讨代谢型谷氨酸受体7（ GRM7）基因的拷贝数变异(CNVs)与精神分裂症的相关性。方法 收集180例中国山西汉族精神分裂症患者和33名正常对照的DNA样本及资料。应用实时定量PCR方法检测位于 GRM7基因外显子2上游200 bp处和外显子8附近的CNVs。同时对实时定量PCR扩增区的基因序列进行测序。结果 相对拷贝数分析显示，在 GRM7基因外显子2上游200 bp处，1例精神分裂症患者具有双等位基因缺失，13例患者和1名正常对照具有单个等位基因缺失。测序显示 GRM7基因外显子2上游200 bp处实时定量PCR反向引物(GRM7-SV-1R)的3’末端上游第5个碱基发生了C>G变异，实时定量PCR扩增中发现的等位基因缺失均由碱基变异导致。结论 实时定量PCR结合测序可以避免PCR引物序列变异导致的假阳性缺失，是检测CNVs的有效方法。本研究 GRM7基因的CNVs与精神分裂症无相关性，提示 GRM7基因的CNVs可能不是中国汉族精神分裂症发病的主要原因，然而其潜在的罕见CNVs可能和部分精神分裂症有关，有待于进一步研究。
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  神经黏附分子NECL1抑制神经胶质瘤细胞的迁移、侵袭并诱导其分化

  阴彬;陈涛;高静;袁建刚;彭小忠

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 669-673. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.003

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  摘要：目的 在NECL1表达缺失的神经胶质瘤细胞系中探讨神经黏附分子NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响。方法 在U251胶质瘤细胞系中，通过划痕及Transwell实验观察NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响，通过对细胞外金属蛋白酶活性的检测证明NECL1恢复表达后对肿瘤侵袭能力的影响。利用不同培养密度的U251细胞，对NECL1恢复表达后细胞形态进行观察，并通过Western blot实验验证相关蛋白的表达。结果 在NECL1表达缺失的胶质瘤细胞系U251中，恢复NECL1的表达后，肿瘤细胞的迁移及侵袭受到了抑制。 NECL1恢复表达的U251细胞有向星形胶质细胞分化的趋势，星形胶质细胞标志蛋白神经胶质纤维酸性蛋白的表达上调。结论 神经黏附分子NECL1作为一个潜在的胶质瘤抑制因子，对肿瘤细胞的迁移和侵袭能力均有不同程度抑制作用，同时，NECL1具有诱导神经胶质瘤U251细胞向星形胶质细胞方向分化的潜能。
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  靶向性抗肿瘤融合蛋白-表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶磷酸化的影响

  王存琳;陈虹;马晓骊;王欣;黄秉仁

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 674-678. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.004

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  摘要：目的 探讨经表皮生长因子受体介导进入肿瘤细胞的融合蛋白表皮生长因子-腺病毒早期转录区4第4编码蛋白（EGF-E4orf4）在细胞内的转运及对胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化的影响。方法 采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在MDA-MB-231和BGC823细胞中的转运和代谢特点，Western blot检测融合蛋白引起的细胞内ERK磷酸化水平的改变。结果 融合蛋白可在细胞内累积，向细胞核周围聚集，并与细胞早期内体和晚期溶酶体共定位；融合蛋白能快速触发细胞内ERK发生磷酸化，磷酸化水平在10min时最强，之后逐渐回落至刺激前水平，活化ERK的能力较表皮生长因子弱。结论 融合蛋白EGF-E4orf4在细胞内经内体-溶酶体途径发生缓慢降解；在MDA-MB-231和BGC823细胞中，融合蛋白的作用特点存在明显差异，可能是导致融合蛋白对二者抑瘤率不同的原因之一。
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  新疆哈萨克族人神经前体细胞表达发育调控蛋白4基因遗传变异的分布及其与高血压的相关性

  郭艳英;李南方;姚小光;王红梅;杨进;周玲;罗文利;洪静;杨晶晶

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 679-685. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.005

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  摘要：目的 探讨神经前体细胞表达发育调控蛋白4（ NEDD4）基因功能区的多态位点与新疆哈萨克族人高血压病的相关性。方法 采取以流行病学调查为基础的病例对照研究，选择938例哈萨克族自然人群（包括451例高血压患者和487例对照）作为研究对象。首先测序筛查哈萨克族高血压病患者 NEDD4基因功能区的变异位点，选择代表性变异位点应用TaqMan-PCR在自然人群中进行基因型鉴定及病例对照关联研究。结果 在 NEDD4基因的功能区共发现13个新的和15个已知的变异位点，其中包括7个错义突变。 NEDD4基因的9个代表性变异位点中，4个低频率的错义突变不是哈萨克族人高血压病特有的变异，5个常见单核苷酸多肽及其组成的各单倍型在高血压病例与对照组间的频率分布差异无显著性（P＞0.05）。结论 NEDD4基因遗传变异与哈萨克族人高血压病无相关性。
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  亚硒酸钠诱导NB4细胞中细胞色素c氧化酶亚基IV的下调机制

  李竹石;杨洋;许彩民

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 686-691. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.006

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  摘要：目的 探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的过程中，细胞色素c氧化酶亚基IV（COX IV）表达的变化情况及其机制和意义。方法 用20μmol/L亚硒酸钠作用NB4细胞不同时间，Western blot和RT-PCR分别检测COX IV蛋白和mRNA表达的变化。活性氧清除剂预处理细胞后Western blot检测COX IV蛋白表达的变化以及caspase-3的激活。caspase-3抑制剂预处理细胞后Western blot检测COX IV蛋白表达的变化。瞬时转染干扰NB4细胞中COX IV表达后，流式细胞术检测细胞凋亡。结果 亚硒酸钠诱导NB4细胞COX IV蛋白表达显著下调，但mRNA表达水平无变化。活性氧清除剂能完全逆转亚硒酸钠引起的COX IV表达下调与caspase-3激活。caspase-3抑制剂能部分逆转亚硒酸钠引起的COX IV表达下调。干扰COX IV表达后，亚硒酸钠诱导的细胞凋亡显著增加。结论 在亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中，COX IV在蛋白水平显著下调。活性氧介导COX IV下调与caspase-3激活，caspase-3在一定程度上参与COX IV表达下调，抑制COX IV能显著提高NB4细胞对亚硒酸钠诱导凋亡的敏感性。
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  组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7促进Ngn1基因的表达

  戴津泼;张业;沈珝琲

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 692-695. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.007

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  摘要：目的 构建小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7真核表达载体并初步探讨其对神经细胞分化的影响。方法 采用基因工程技术，克隆小鼠Setd 7基因并将其插入真核表达载体pCMV-3tag-6中，之后转染HEK 293T细胞，Western blot验证其表达；利用实时荧光定量PCR技术检测在神经分化模型（全反式维甲酸诱导P19神经分化）中，Setd7对神经分化关键基因Ngn 1的调控；利用双荧光素酶报告系统检测Setd7对Ngn 1启动子活性的影响；构建小鼠Setd 7 siRNA干扰质粒，利用实时荧光定量PCR技术检测其抑制效果以及对 Ngn 1 mRNA表达的影响。结果 成功构建了小鼠Setd 7基因的真核表达载体，可在HEK 293T细胞中有效表达；Setd7可促进Ngn 1 mRNA表达；Setd7能够促进Ngn 1启动子活性； 降低Setd 7抑制Ngn 1 mRNA 表达。结论 组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7能够促进神经分化关键基因Ngn 1的转录。
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  腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶的表达、纯化及晶体分析

  武岚;钱忠;付俊;缪时英;王琳芳

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 696-701. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.008

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  摘要：目的 纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925，用于晶体生长和三维结构分析。方法 将tte 1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中，将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E. coli BL 21(DE 3)后获得表达菌株。该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导高效表达出带有谷胱甘肽S转移酶标签的可溶性融合蛋白，经过Glutathione SepharoseTM4B亲和层析、Resource Q 6mL离子交换层析和10/300 superdex 200分子筛层析纯化后，得到目的蛋白TTE1925。结果 纯化后蛋白的纯度达到99％以上。蛋白采用悬滴气相扩散法得到衍射至1.9 的棒状晶体。结论 成功制备了高纯度TTE1925蛋白，获得TTE1925蛋白质晶体，为进一步解析变旋酶的三维结构及其生物学功能分子机制研究奠定了基础。
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  神经元限制性沉默因子与大鼠骨髓间充质干细胞向神经元诱导分化的关系

  刘斌;李宏图, ;张涛;孟凡彪;刘晓玉;庞希宁

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 702-706. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.009

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  摘要：目的 分析神经元限制性沉默因子（NRSF）以及NRSF调控的基因在β-巯基乙醇诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）向神经元分化过程中表达的变化,探讨NRSF在大鼠MSCs向神经元分化的作用及MSCs向神经元分化的机制。方法 采用β-巯基乙醇、无血清的DMEM培养液和二甲基亚砜诱导大鼠MSCs分化成神经元，再通过实时定量PCR分析NRSF以及NRSF调控的基因在诱导前后表达的变化。结果 应用β-巯基乙醇、无血清DMEM培养液和二甲基亚砜的诱导方案可以将MSCs诱导分化成神经元样细胞，诱导后的细胞神经元标记物神经元特异性烯醇化酶呈阳性，实时定量PCR检测NRSF基因表达显著下调，NRSF的靶基因神经营养酪氨酸激酶三型受体、突触相关蛋白25、L1细胞黏附分子、神经元钙结合蛋白受体表达有不同程度的上调。结论 MSCs的神经元分化与NRSF下调及其调控的神经元分化相关基因表达上调有关。NRSF很可能是MSCs向神经元方向分化的关键基因，抑制NRSF表达可能是促进MSCs向神经元分化的关键步骤。
临床经验交流
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  冠、根分离法治疗根分歧病变及疗效观察

  周正;昌春丽;胡运东

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 706-706. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.010

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论著
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  Ezh2在全反式维甲酸诱导的P19神经细胞分化过程中的作用

  葛翠婷;张业;沈珝琲

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 707-711. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.011

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  摘要：目的 探讨组蛋白甲基转移酶Ezh2在P19神经细胞分化中的作用。方法 通过Western印迹检测全反式维甲酸 (RA)诱导TuJ1蛋白的表达；通过染色质免疫沉淀技术检测Ngn 1基因启动子区Ezh2的结合与H3K27三甲基化的变化；通过实时定量RT-PCR检测RA诱导P19细胞分化后 Ezh 2 mRNA表达。结果 在RA诱导P19细胞中，Ezh2与H3K27me3在Ngn 1启动子区的结合逐渐升高，并在诱导后第2天达到高峰，然后迅速降低，随后出现神经分化特异标志。结论 Ezh2在RA诱导的P19细胞早期产生一种抑制性的组蛋白修饰标志H3K27me3，通过避免Ngn 1的过早表达，确保P19细胞的正常分化。
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  新疆哈萨克族prostasin基因变异与原发性高血压的关联性

  常建航;李南方;张菊红;杨进;王红梅;周玲;洪静;罗文利;王磊

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 712-719. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.012

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  摘要：目的 探讨新疆哈萨克族prostasin基因变异与原发性高血压的关系。方法 采用整群随机抽样方式，以生活在新疆阜康市30岁以上的哈萨克族牧民938名为研究对象，进行标准化问卷调查、体格检查。根据2005年中国高血压防治指南选取研究对象：原发性高血压组451例，正常血压组487例。采用测序方法对prostasin基因所有外显子及启动子区测序；应用TaqMan PCR方法对代表性的变异（297A>C、2827C>T、E342K）进行基因分型，计算各基因型在两组中的分布频率。结果 发现10个变异位点：-36G>C，-27C>T，78G>A，81G>C（rs8049043），297A>C，350C>T，351A>C，2827C>T，3482G>A（E342K），3783A>G。对E342K和2827C>T成功分型，E342K突变仅有1例，且为原发性高血压患者。2827C>T多态性存在CC、CT、TT 3种基因型和C、T两种等位基因。3种基因型在原发性高血压病组和正常血压组中的频率分别为81.0％、17.3％、1.7％和80.3％、18.9％、0.8％，C、T等位基因频率分别为89.6％、10.4％和89.8％、10.2％，基因型和等位基因频率在两组间的差异均无显著性（χ2=2.084，P=0.353和χ2=0.001，P=0.973）。各基因型之间血压水平的差异均无显著性（P>0.05）。结论 Prostasin基因2827C>T多态性可能与原发性高血压发生无关；E342K突变可能部分参与新疆哈萨克族原发性高血压的形成。
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  ShcD通过PTB和SH2结构域和TrkC受体相互作用

  尤元刚;李玮琦;阴彬;彭小忠

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 720-723. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.013

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  摘要：目的 探讨ShcD与TrkC的相互作用,以深入认识TrkC下游信号转导的分子机制。方法 利用酵母双杂交技术，将TrkC及TrkC各种突变体的胞内区分别克隆到酵母质粒pAS2-1中,将ShcD及ShcD的4个结构域（CH2、PTB、CH1和SH2结构域）分别克隆到酵母质粒pACT2中，将它们分别共转化酵母菌后，通过β-半乳糖苷酶活性检测它们之间的相互作用。将TrkC克隆进pmRFP载体（带红色荧光蛋白），ShcD克隆进pEGFP载体（带绿色荧光蛋白）,并将pmRFP-TrkC和pEGFP-ShcD共转染至293T细胞中，采用荧光共聚焦显微镜观察其定位情况。结果 ShcD可以和TrkC但不能和激酶失活突变体TrkCM1（K572A）结合；PTB和SH2结构域均可以与TrkC受体结合并且PTB结构域结合于TrkC的 NPQY模体；ShcD和TrkC在293T细胞中共同定位于胞膜和胞浆中。结论 ShcD通过PTB和SH2结构域以依赖于受体激酶活性的方式结合TrkC。
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  稳定表达SirT7对其转染的P19细胞的增殖抑制作用

  吕建祎;张业;沈珝琲

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 724-727. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.014

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  摘要：目的 构建稳定表达SirT7的P19细胞系并探讨Ⅲ类组蛋白去乙酰基酶SirT7在该细胞中对细胞增殖和细胞周期的影响。方法 将SirT7的真核表达质粒转染进入P19细胞，并利用筛选标记筛选出稳定克隆，采用Western blot、流式细胞仪等方法观察SirT7对P19细胞生长和细胞周期的影响。结果 稳定表达Sirt7 P19 细胞系细胞生长速度减慢，流式细胞仪荧光分析呈现明显的G1/S期阻滞。 结论SirT7可导致P19细胞的周期阻滞，并抑制细胞的增殖。
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  单胺氧化酶A启动子可变数目重复序列多态性与中国北方汉族人群重性抑郁症的关联分析

  张洁旭;陈彦博;张克让;许琪;沈岩

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 728-734. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.015

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  摘要：目的 探讨单胺氧化酶A（MAOA）基因启动子可变数目重复序列（VNTR）多态性与重性抑郁症易感性的关系。方法 采用PCR技术检测512例重性抑郁症患者与566名对照VNTR重复序列分布频率是否具有差异，并使用汉密顿焦虑量表对重性抑郁症患者进行评估。结果 男性及女性重性抑郁症患者MAOA VNTR等位基因频率与对照相比差异无显著性；基因型分析显示，女性重性抑郁症患者与对照相比，L等位基因携带者频率显著升高（P=0.002），男性患者与对照相比分布频率差异无显著性（P=0.17）。表型分析显示，女性患者携带L等位基因的基因型（P=0.0056）与汉密顿焦虑量表“害怕”表型的发生显著相关。结论 MAOA VNTR多态性可能与女性中国北方汉族人群重性抑郁症发病相关，且可提高抑郁症表型的发生。
论著摘要
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  遗传性血管性水肿新的基因突变

  汤蕊;张宏誉

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 734-734. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.016

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论著
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  胰岛素样生长因子结合蛋白-6的核定位

  韩建军;黄秉仁;王欣;马晓骊;陈虹

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 735-739. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.017

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  摘要：目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白-6（IGFBP-6）在细胞中的定位。方法 用重叠PCR法构建IGFBP-6的核定位序列缺失体（pEGFP-C1-BP6ΔNLS）及突变体（pEGFP-C1-BP6-Mut）质粒，与野生型IGFBP-6质粒分别转染PC-3M细胞，激光扫描共聚焦显微镜观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的分布，并计算这些转染阳性细胞中绿色荧光强度的核质比（Fn/c）。结果 激光扫描共聚焦显微镜观察显示，野生型IGFBP-6绿色荧光信号在细胞核内聚集分布，与转染EGFP空载体的对照组相比，Fn/c差异具有显著性（P<0.05）。过表达pEGFP-C1-BP6ΔNLS的细胞中，绿色荧光信号在细胞核内聚集的现象消失，在整个细胞呈均匀分布；过表达pEGFP-C1-BP6-Mut的细胞中，细胞核内绿色荧光信号也有所减弱；两者的Fn/c与转染野生型IGFBP-6的细胞相比差异均具有显著性（P<0.05）。结论 IGFBP-6可以定位于细胞核内，它在细胞核内的分布与其核定位序列相关，为进一步研究IGFBP-6不依赖于胰岛素样生长因子的生物学活性提供了新的实验依据。
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  上皮细胞钠通道α亚单位基因4种单核苷酸多态性与新疆哈萨克族人原发性高血压的相关性

  徐红;李南方;洪静;张丽;周玲;李涛;欧阳玮琎;成秋燕

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 740-745. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.018

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  摘要：目的 研究上皮细胞钠通道（ENaC）基因启动子区G2139A、G3091A、第13外显子区T663A及第2内含子区T3593C位点的单核苷酸多态性(SNPs)及其构成的单体型与新疆哈萨克族人原发性高血压（EH）的相关性。方法 采用病例-对照研究的方法，选择牧区哈萨克族EH患者(EH组)252例和血压正常者(NT组)254例，采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性的方法，鉴定不同个体上述4个位点的基因型及等位基因的类型，分析4种SNPs基因型及等位基因在该民族人群的分布特征及其在EH与NT组分布频率的差异，分析4个位点连锁不平衡关系，观察4种SNPs组成的单体型与新疆哈萨克族人EH的相关性。结果 新疆哈萨克族αENaC基因存在上述4个位点的SNPs，在总体人群中，G2139A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为26.2％、52.3％和21.5％，A、G两种等位基因的分布频率分别为52.37％和47.63％；G3091A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为19.0％、52.5％和28.5％，A、G两种等位基因的分布频率分别为45.56％和59.44％；T663A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为15.6％、49.9％和34.5％，A、G两种等位基因的分布频率分别为40.53％和59.47％；T3593C位点TT、TC、CC基因型的频率分别为88.5％、10.5％和1.0％，T、C两种等位基因的分布频率分别为93.77％和6.23％。4个位点基因型的分布均符合Hardy－weinberg平衡（P＞0.05）。4种SNPs基因型及等位基因的分布频率在EH和NT组差异均无显著性(P＞0.05)。4个位点间不存在连锁不平衡关系。单体型分析显示由2139G、3091A、663G和3593T等位基因构成的单体型在EH组显著高于NT组(P＜0.01)，由2139A、3091A、663A和3593C等位基因构成的单体型在NT组显著高于ET组(P＜0.05)。结论 虽然αENaC基因G2139A、G3091A、T663A及T3593C SNPs作为单个位点可能不足以引起个体EH的发生或者仅对EH的发生产生极其微效的作用，但其所构成的单体型可能对新疆哈萨克族人EH的发病发挥重要作用，其中2139G、3091A、663G和3593T等位基因构成的单体型可能与该民族EH的发生相关，而2139A、3091A、663A和3593C等位基因构成的单体型可能是该民族EH发生的保护因子，可降低该民族EH的患病风险，ENaC基因是新疆哈萨克族高血压发生的重要易感基因。
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  热激诱导Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子基因和人白细胞抗原的表达

  晏丽;程谟斌;张业;沈珝琲

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 746-750. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.019

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  摘要：目的 检测热激对Jurkat细胞中主要组织相容性复合物Ⅱ类转录激活因子（CⅡTA）的表达，及其对下游人类白细胞抗原（HLA-DR）表达的影响。方法 采用实时RT-PCR检测42℃热激和干扰素-γ(IFN-γ)作用前后Jurkat细胞中CⅡTA mRNA的变化。采用Western blot检测热激和IFN-γ作用前后Jurkat细胞中CⅡTA 蛋白的表达变化。采用流式细胞仪荧光分析热激前后Jurkat细胞表面HLA-DR的表达。结果 在Jurkat细胞中，热激可诱导CⅡTA mRNA和蛋白的表达，而IFN-γ处理后无明显变化。与正常Jurkat细胞相比，热激后HLA-DR在Jurkat细胞表面的抗原浓度明显增加（P<0.01）。结论 热诱导Jurkat细胞中CⅡTA和HLA-DR先后表达增高。提示热激可能在免疫基因表达缺陷的细胞中，重建相关基因的功能，为肿瘤热疗提供新的依据。
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  Dok6促进神经营养因子3诱导的过表达原肌球蛋白相关激酶C的PC12细胞突起生长

  李玮琦;尤元刚;阴彬;彭小忠

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 751-755. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.020

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  摘要：目的 探讨胞浆接头蛋白Dok6对PC12细胞突起生长的影响。方法 将Dok6的不同功能模体片段构建至TrkC/Y516F突变体中形成融合克隆。利用Western blot法验证各个融合克隆在细胞内是否稳定表达。利用瞬时转染的方法将融合克隆导入PC12细胞进行过表达，之后用NT-3刺激PC12细胞突起生长，检测不同Dok6片段的效应。结果 各个融合克隆均能在细胞内稳定表达。融合了Dok6 PTB结构域+C末端以及单纯C末端的融合克隆均可以挽救由于TrkC受体516位酪氨酸突变导致的PC12细胞突起生长减少，而融合单纯的Dok6 PTB结构域则无此效应。结论 Dok6可以促进NT-3诱导的过表达TrkC的PC12细胞突起生长，并且此效应与其C末端密切相关。
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  PIH1D1对染色质重塑复合物SNF5亚基降解的影响

  翟妞; 张业;沈珝琲

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 756-759. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.021

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  摘要：目的 探讨PIH1D1对其结合蛋白SNF5的稳定性的影响。方法 通过蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)和蛋白酶体抑制剂MG132抑制作用找到SNF5的降解路径，而后转染PIH1D1真核表达质粒，探讨其对SNF5稳定性的影响。结果 得到CHX和MG132的最佳作用浓度；SNF5通过蛋白酶体依赖的途径降解；PIH1D1抑制SNF5的降解，从而稳定SNF5。结论 PIH1D1可能通过阻断蛋白酶体依赖途径，抑制SWI/SNF染色质重塑复合物SNF5亚基的降解，从而起到稳定SNF5的作用。
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  神经元抑制性沉默元件双链RNA慢病毒载体的构建与鉴定

  李宏图, ;刘晓玉;庞希宁

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 760-764. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.022

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  摘要：目的 构建神经元抑制性沉默元件（RE-1/NRSE）双链RNA的慢病毒载体。方法 根据RE-1/NRSE序列合成靶序列的寡核苷酸序列，退火形成双链DNA，与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pGC-LV载体连接产生L-smRE-1/NRSE慢病毒载体，采用PCR和测序对阳性克隆进行鉴定。用L-smRE-1/NRSE和包装质粒pHelper 1.0、pHelper2.0共转染293T细胞，包装产生慢病毒颗粒，在倒置荧光显微镜下观察293T细胞中绿色荧光蛋白的表达量，并计算病毒滴度，初步观察其对大鼠间充质干细胞的转染效率。结果 PCR和测序证实，构建出了RE-1/NRSE双链RNA的慢病毒载体L-smNRSE/RE-1。包装慢病毒，浓缩病毒悬液的滴度为4×108 TU/ml。慢病毒颗粒能稳定转染大鼠间充质干细胞，当感染复数为80时，感染效率达100%。结论 成功构建了RE-1/NRSE dsRNA的慢病毒表达载体。
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  GAGA元件相关蛋白在人类细胞中对含有果蝇GAGA元件启动子的调控

  赵吉成;陈永军;张业;沈珝琲

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 765-769. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.023

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  摘要：目的 探讨在人类细胞中GAGA元件相关蛋白（GRP）是否对含有果蝇GAGA元件（dGAGA）的启动子具有调控作用及其机制。方法 共转染果蝇GAGA因子（dGAF）、GRP与含有野生型或突变型dGAGA的ftz启动子氯霉素乙酰转移酶CAT报告基因质粒，利用实时RT-PCR检测启动子活性；电泳迁移率变更分析检测Jurkat细胞核抽提物与dGAGA探针的结合。结果 Jurkat 细胞内，GRP既可单独、也可协同dGAF激活含野生型GAGA元件的ftz启动子活性，使该活性在一定范围内以剂量依赖关系升高，过量时，则引起阻遏作用；而GRP与dGAF均不能激活含突变型GAGA元件的ftz启动子。电泳迁移率变更分析初步显示Jurkat 细胞内有与GAGA元件结合的蛋白存在。结论 Jurkat细胞中有人类GAGA元件结合蛋白存在，它既可与GAGA元件结合直接参与人类基因的调控，又可介导依赖于GRP剂量对相关基因的双向调节。
短篇论著
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  Aβ单链抗体基因腺相关病毒载体的构建

  蔡炯;刘飞;李方;王世真

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 770-772. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.024

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综述
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  过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1,能量代谢的共激活因子

  王瑞;常永生;方福德

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 773-777. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.025

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  摘要：转录共激活因子过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子1（PGC1）家族是一类特异性存在于高能量代谢组织器官的因子，它们通过对转录因子的辅助作用促进下游基因的表达，从而调节糖异生、脂肪酸氧化、脂蛋白的合成与分泌、线粒体生物合成及氧化磷酸化解耦联等。PGC1蛋白序列无DNA结合结构域，通过与转录因子的相互作用完成对基因的表达调控。机体对PGC1的活性调节可以通过转录水平或蛋白磷酸化、乙酰化/去乙酰化、甲基化、 泛素化等多种共价化学修饰完成。PGC1的表达失调与糖尿病、肥胖、高血脂症、动脉硬化、脑神经元坏死性疾病等有密切关系。
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  棕色脂肪的来源及形成研究进展

  严治涛;李南方

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 778-781. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.026

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  摘要：棕色脂肪组织通过线粒体的脂质氧化解耦联产热参与人体的能量平衡。目前认为棕色脂肪有Myf5阴性的祖细胞（与白色脂肪细胞相同的来源）和Myf5阳性的祖细胞（与肌肉细胞相同的来源）两种来源，并且由于棕色脂肪细胞的不同来源，有主要路径（Myf5阳性的祖细胞发育分化而来的路径，主要分化成分布在经典部位的棕色脂肪细胞）和旁路（Myf5阴性的祖细胞发育分化而来的路径，主要分化成分布在白色脂肪内的棕色脂肪细胞）等多条形成路径。
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  Sirt1基因的研究进展

  乔爱君;左瑾;刘晓军;邵迪;朱鏐娈;崔安芳;孔星星;方福德;常永生

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 782-785. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.027

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  摘要：Sirt1是在哺乳动物细胞中发现的与酵母沉默信息调节因子Sir2同源性最高的同系物，在成熟组织中广泛表达，在胚胎早期和生殖细胞中含量丰富，且与众多基因的转录调控、能量代谢及细胞衰老过程的调节有关。Sirt1可促进脂质动员和肝脏糖异生，能调控胰岛β细胞的胰岛素分泌。另外，Sirt1还是内源性的凋亡抑制因子。随着对其研究的深入，Sirt1将有望在新药作用靶点及疾病治疗方面发挥作用。
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  甲基化作用与肿瘤

  邵迪;崔安芳;朱鏐娈;乔爱君;孔星星;刘晓军;常永生;方福德

  中国医学科学院学报. 2009, 31(6): 786-790. https://doi.org/10.3881/j.issn.1000-503X.2009.06.028

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  摘要：对表观遗传学进行的研究表明，表观事件中甲基化的发生与肿瘤的发生发展密切相关。表观遗传调控主要通过DNA甲基化和组蛋白甲基化修饰控制细胞的增殖和分化、维持机体的稳定，但甲基化的异常改变常导致肿瘤的发生、发展。本文主要综述有关肿瘤基因组和组蛋白甲基化的理论研究、检测方法及甲基化在临床上作为生物学标记和药物靶点的应用。