摘要:目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对培养的乳鼠心肌细胞内受磷蛋白(PLB)和肌浆网钙泵蛋白同功酶(SERCA2a)基因表达及细胞内游离钙离子浓度的影响。方法 体外培养的乳鼠心肌细胞被随机分成对照组和不同浓度TNFα(1、10、30、50、70 μg/L)干预组,用单管一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting 技术,观察TNFα对乳鼠心肌细胞PLB和SERCA2a基因表达的影响。采用Fluo-3/Am荧光染色剂负载细胞,在激光共聚焦显微镜下测定TNFα对单个乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度的影响。结果 TNFα浓度依赖性增高PLB mRNA和蛋白质的表达,10、30、50、70 μg/L TNFα组PLB mRNA表达量分别较对照组增加66%、106%、141%、189%(P < 0.05),蛋白质的表达分别较对照组提高30%、48%、73%、114%(P < 0.001)。而1 μg/L TNFα组与对照组PLB mRNA和蛋白质表达差异均无显著性。TNFα不影响SERCA2a的表达。50 μg/L TNFα作用细胞24 h,能降低异丙肾上腺素刺激的[Ca2+]i变化幅度的增高,[Ca2+]i变化幅度较对照组减少33%(P < 0.01),但对静息状态下[Ca2+]i变化幅度无影响。结论 TNFα可增强心肌细胞内PLB的表达,降低心肌细胞内[Ca2+]i的变化,这可能与TNFα对心肌细胞的负性肌力作用有关。