目的 原核表达并纯化全长的人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)蛋白,检测主动免疫ACTL7a产生抗精子抗体后小鼠睾丸的损伤情况。方法 构建重组表达质粒pET30a-ACTL7a,以重组质粒转化E.coli Rosseta(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂纯化和SDS-PAGE切胶分离目的蛋白,溶胶后以表达的ACTL7a蛋白免疫ICR小鼠。ELISA检测抗体效价,PAS染色检测主动免疫后曲细精管的发育。结果 经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的蛋白ACTL7a,纯化后免疫ICR小鼠,经PAS染色发现主动免疫ACTL7a的小鼠其睾丸曲细精管出现生精细胞脱落、核凝聚、生精细胞缺如、生精细胞退化等异常的管腔。结论 成功构建了ACTL7a基因全长的原核表达载体,经诱导表达和纯化获得高纯度的目的蛋白。发现ACTL7a蛋白主动免疫ICR小鼠产生抗精子抗体后,小鼠睾丸的曲细精管发生严重损伤。
目的 研究G蛋白耦联的内向整流型钾通道4(GIRK4)基因多态性与新疆维吾尔族血脂异常的相关性。方法 采用TaqmanPCR方法,对GIRK4基因rs2604204、rs4937391、rs6590357、rs11221497多态性在维吾尔族自然人群中进行基因分型,按常规方法测定血脂水平并进行比较分析。结果 50岁以下人群中,三酰甘油异常组和正常组rs6590357位点的基因型分布差异有统计学意义(P=0.005),总胆固醇异常组和正常组rs11221497位点的基因型分布差异有统计学意义(P=0.011)。采用Logistic回归方法校正性别、肥胖等因素后,50岁以下人群中rs6590357位点与TG异常、rs11221497位点与TC异常仍然为阳性关联。rs6590357位点CT+TT基因型组中TG水平明显高于CC组(P=0.014),rs11221497位点CC基因型组中TC水平明显高于CG+GG组(P=0.006)。对其进行单体型分析后发现,H3单体型频率在TG异常组与正常组间差异有统计学意义(P=0.007)。结论 GIRK4基因rs11221497和rs6590357位点多态性可能与新疆维吾尔族血脂异常相关。
目的 构建重组人白细胞介素-35[rhIL-35-IgG1(Fc)]蛋白的真核表达载体并表达纯化该蛋白,研究IL-35与其受体糖蛋白130(gp130)的结合作用。方法 构建IL-35真核表达载体pSTEP2-IL35-LFc,转染到HEK293T细胞中,采用亲和色谱分离纯化获得重组IL-35蛋白,SDS-PAGE及Western blot法鉴定蛋白表达,ELISA法检测IL-35-Fc与其受体链gp130的结合作用,并在M1小鼠白血病细胞上研究IL-35对gp130的生物学作用。结果 获得高纯度的人IL-35-Fc重组蛋白,ELISA法检测结果发现IL-35-Fc与其受体链gp130具有结合作用,并且IL-35在M1小鼠白血病细胞上对gp130具有中和作用。结论 成功制备了具有生物活性的人IL-35-IgG1(Fc)重组蛋白,发现IL-35能够与其受体链gp130的结合,在M1小鼠白血病细胞上对gp130也具有中和作用。
目的 探讨间接共培养体外诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)向上皮样细胞定向分化的可行性。方法 消化培养法获取人结膜上皮细胞,密度梯度离心法联合贴壁培养法培养MSCs,并对所培养的细胞进行免疫细胞化学鉴定。将人MSCs和结膜上皮细胞进行非接触共培养,免疫细胞化学、RT-PCR、Western blotting对分化细胞进行鉴定。结果 体外培养的人MSCs阳性表达CD29,不表达CD34。结膜上皮细胞贴壁生长,呈不规则圆形,阳性表达细胞角蛋白4(CK4)。MSCs与结膜上皮细胞共培养10d后,大部分细胞呈不规则圆形外观,基因和蛋白水平均表达CK4。结论 与人结膜上皮细胞体外非接触共培养可诱导人MSCs向上皮样细胞定向分化。
目的 研究中药筋脉通对于糖尿病(DM)大鼠背根神经节(DRG)氧化应激及细胞凋亡的影响。方法 采用链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg一次性腹腔内注射的方法制造DM大鼠模型,随机分为模型组,筋脉通小、中、大剂量组和维生素C组。所有实验大鼠灌胃16周处死,分离DRG,采用尼氏染色观察DRG形态学变化,免疫组织化学法和qRT-PCR 法检测大鼠DRG中NADPH氧化酶p22-phox亚基、细胞色素(Cyt C)、Bcl-2及Caspase-3的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 与模型组相比,各治疗组的NADPH氧化酶p22-phox亚基蛋白表达、Cyt C蛋白表达、Caspase-3 mRNA及其蛋白表达和细胞凋亡率均显著降低,而Bcl-2 mRNA及其蛋白表达显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)且作用呈现一定的剂量相关性,其中,以筋脉通大剂量组作用最佳,与维生素C组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 中药筋脉通可防治DM周围神经病变大鼠周围神经组织损伤,抑制氧化应激、减少细胞凋亡是其作用的重要途径之一。大剂量筋脉通疗效最佳,其作用优于维生素C。
双酚A(BPA)是一种酚类环境雌激素,也是人们在日常生活中普遍接触到的一类物质。研究发现,雌性哺乳动物长期接触BPA,会使机体的内分泌紊乱,引起卵巢、子宫、阴道和输卵管等生殖器官形态及功能上的改变。BPA与不同的靶分子和靶组织相互作用,会引起不同的作用效果。为进一步阐明BPA对雌性生殖系统的危害,本综述总结了BPA对卵巢、子宫、阴道、输卵管等各部分结构和功能的影响及其作用机制。